Diagnóstico de Staph (testes de laboratório) e epidemiologia (onde vive)

Onde vive o S. aureus?

S. aureus vive em:

Reservatório de Staph

Reservatório primário paraS.áureo(incluindo MRSA) é um ser humano. Staph é comum em vacas (mastite), aves e animais de estimação (cães, gatos). No Canadá, eles encontraram MRSA em porcos (1).

Como se espalha a infecção por estafilococos

O Staph pode se espalhar de um local da pele para outro (autoinfecção), por exemplo, cutucando o nariz seguido de coçar a pele ou pelas roupas.De pessoa para pessoaa propagação é possível através do contato pele a pele ou com o compartilhamento de brinquedos, toalhas, equipamentos esportivos, chuveiros públicos, saunas ou piscinas. Uma infecção também pode ser transmitida porportadores de estafilococos saudáveis ​​, especialmente pelo pessoal de saúde. Staph pode se espalhar de humano paracães ou outros animais de estimaçãoe depois de volta ao humano (2).S. aureuspode ser encontrado na pele, cabelo, narinas ou saliva de cães. Endocardite grave por estafilococos foi relatada após uma pequena mordida de cachorro (3). Infecção porordenhando uma vacater mastite estafilocócica é possível (4).Intoxicação alimentar por estafilococospode ocorrer após a ingestão de alimentos contaminados com estafilococos, liberados de um trabalhador do setor alimentício infectado.

Os pontos de entrada da infecção por estafilococos são:

• Pele:um folículo piloso durante pequenos traumas de barbear ou depilação, acne, eczema (psoríase, dermatite atópica), lesões na pele, queimaduras, injeções, piercings e tatuagens, cateteres vasculares e urinários, feridas cirúrgicas;
• Trato respiratório: a pneumonia estafilocócica pode ser uma complicação da gripe ou aspiração.

Continuum da fazenda à mesa de S. aureus

Staph pode sobreviver em animais domésticos, como cães, gatos e cavalos, e pode causar problemas nos pés em galinhas e mastite em vacas. Quando as bactérias entram no leite ou na carne, elas se multiplicam e liberam toxinas. A intoxicação alimentar é possível mesmo com leite cozido, sorvete ou carne defumada, como salame, poisS.áureoas toxinas não são destruídas pelo calor.

Quem corre o risco de contrair infecção por estafilococos?

São eles:

Período de incubação de S. aureus

Período de incubação deS.áureoa infecção pode variar muito, mas geralmente dura entre 4 a 10 dias (5). O período de incubação na intoxicação alimentar por estafilococos é de 30 minutos a 8 horas (6).

Incidência e mortalidade por infecção por estafilococos

Nos Estados Unidos, em y. 2006, aproximadamente 32% da população foi colonizada comS. aureuse 0,8% com MRSA. O MRSA causa cerca de 94.000 infecções graves e cerca de 19.000 mortes nos EUA a cada ano (7).

1. MRSA em suínos (thepigsite.com)
2. Propagação humano – animal – humano de S. aureus (cdc.gov)
3. Mordida de cachorro resultou em endocardite staoh (medscape.com)
4. Mastite estafilocócica em vacas (usjersey.com)
5. Período de incubação de S. aureus (cinetwork.com)
6. Período de incubação da intoxicação alimentar por estafilococos (drgreene.com)
7. Morbidade e mortalidade por S. aureus nos Estados Unidos (cdc.gov)

Diagnosticando uma infecção por estafilococos

1. Obtenção de uma amostra de tecido infectado

Para um diagnóstico de infecção por estafilococos, uma amostra de uma lesão infectada (secreção nasal, pus, sangue, líquido cefalorraquidiano, urina, aspirado de células de pulmões ou ossos) deve ser obtida. Os sintomas de infecções por estafilococos são frequentemente causados ​​portoxinas, liberado apenas depoucosestafilococos, portanto, uma cultura de lesão obviamente infectada pode ser negativa! Por este motivo, devem ser fornecidas amostras de mais de uma lesão, se possível.

O que é Staphylococcus aureus? Fotos de foliculite estafilocócica

2. Coloração de Gram

Uma amostra clínica é colocada em uma lâmina e enxaguada com:

1. Violeta Cristal
2. Solução de Iodo (o Mordente)
3. Descolorante (etanol)
4. Safranina (o Contracorante)
5. Água

Após esse procedimento,S.áureoe outros estafilococos devem ser azuis, roxos ou violetas ao microscópio óptico, o que é anotado comoGram-positivo(Gram +), (Figura 1). Bactérias de cor rosa claro são anotadas como Gram negativas (Gram -), (1). A coloração de Gram é realizada apenas quando há expectativa de infecção mista com bactérias Gram + e Gram –.

Figura 1. Gram positivoS.áureo,microscópio óptico, Magn. ~ 100x (fonte: phil.cdc.gov)

3. Cultura de Staphylococcus aureus

Quando o estafilococo é esperado, uma parte de uma amostra médica é espalhada sobre o ágar tripticase de soja (TSA) com 5% de sangue de ovelha (BAP = placa de ágar sangue), (2). Nesse ágar,S.áureoforma colônias amarelo dourado (do branco creme ao laranja), (3), enquantoS.epidermidisforma colônias brancas (Figura 2). A cultura geralmente precisa16-18 horascrescer (até 48 horas para hemocultura) a 35°C (4).S.áureo geralmente é hemolítico no sangue de ovelha eS.epidermidis não é. Em amostras mistas, contendo bactérias Gram + e -, uma placa de CNA à base de ágar Columbia (colisitina/ácido naladíxico) para suprimir o crescimento de Gram negativo pode ser usada.

Figura 2.Cultura Staph: douradaS.áureo e brancoS.epidermidiscolônia.

4. Testes Enzimáticos

a)Teste de catalaseé realizada adicionando peróxido de hidrogênio a 3% a uma colônia em ágar. Os estafilococos contêm catalase e quebram o peróxido, produzindo O₂e bolha, então eles sãocatalase positiva, o que os distingue dos estreptococos. O teste de catalase é feito apenas quando uma cultura não é típica.

b)Teste de coagulase.S.áureo(eS.intermedius, que não é patogênico para humanos) causa coagulação (coágulo de fibrina) de plasma de coelho, então écoagulase positiva, que o distingue de todos os outros estafilococos. Emteste de aglutinação em látex(teste de lâmina), são utilizadas partículas de látex cobertas com fibrinogênio e IgG. Os anticorpos IgG ligam-se à coagulase emS.áureo, o que resulta na aglomeração de partículas de látex em cerca de 20 segundos (5). Este teste de slide pode ser negativo em uma pequena porcentagem; neste caso, umteste em tubo, que detecta coagulase livre e ligada, deve ser realizada (5). Cerca de 97% dos humanosS. aureus os isolados possuem ambas as formas de coagulase (6).

c)Hemólise.S.áureocausashemóliseem ágar sangue, masS.epidermidisnão. AlgunsS.áureo cepas não são hemolíticas (7).

5. Diagnóstico rápido de Staphylococcus aureus com PCR

Detecção rápida deS.áureoé possível por meio de testes usando Reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR), também chamadoPCR em tempo real.

Princípio da PCR

Em amostras clínicas,S.áureo está presente em quantidades que não são suficientes para serem determinadas com exatidão por qualquer método de teste; portanto, as bactérias precisam ser multiplicadas por cultura, o que geralmente leva de 1 a 4 dias. Com um PCR, alguns milhões de cópias deS.áureoO DNA pode ser obtido diretamente de uma amostra clínica (sem necessidade de cultura) dentro de algumas horas.

Procedimento PCR

Uma amostra de DNA de estafilococo, polimerase – uma enzima necessária para a duplicação do DNA, uma sequência de nucleotídeos (primer), necessária para o início da duplicação, e uma grande quantidade de nucleotídeos livres são necessários para PCR. A polimerase é obtida de uma bactéria Termus aquático (Taq polimerase). Todos os componentes são adicionados a um tubo de ensaio, que é colocado em um termociclador. Após alguns ciclos de PCR, a eletroforese em gel de agarose e a técnica de Southern blotting são usadas para determinar se o DNA obtido éS.áureoDNA (8).

6. Kits de detecção de Staphylococcus aureus

Exemplos de kits, baseados em aglutinação, para detecção de MRSA em amostras clínicas (após cultura) são:Mancha Seca Staphytect Plus^®teste, Pastorex Staph Plus^®teste, o Slidex Staph-Kit^®,Slidex Staph Plus^®teste, o StaphaurexPlus^®teste e teste de estafilase^®. A especificidade e a sensibilidade desses kits foram avaliadas por três institutos de saúde alemães em y. 2005 (9).

Culturas de sangue (BC) Xpert™ MRSA/SAeXpert™ MRSA/SA-Infecção da pele e tecidos moles (SSTI)testes são capazes de detectar simultaneamenteMRSAe S.áureo diretamente de hemoculturas e amostras de tecidos moles infectados, usando PCR. Ambos os testes fornecem resultados em aproximadamente50 minutos (10).

Alimentaçãopode ser testado para enterotoxinas estafilocócicas por ELISA. Presença de S.áureo bactérias nos alimentos podem ser confirmadas  porTAQMAN(PCR) ou Kit Staph Slidex(aglutinação de látex) (11).

Leitepode ser testado para mastite de vaca por Bulk Tank Culture (BTC), California Mastite Test (CMT) e especificamente para mastite por estafilococos porTeste de anticorpos do leite Prostaph©(12). O ensaio PCR multiplex em tempo real para detecção simultânea deEstafilococosáureo,EstreptococosagalactiaeeEstreptococosuberisdiretamente do leite foi desenvolvido (13). O teste leva24 horaspara ser concluído.

Água,para ser testado paraS.áureo, é filtrado e, em seguida, a membrana filtrante é colocada em ágar sal manitol modificado para cultura (14).

7. Teste de sensibilidade a antibióticos de Staphylococcus aureus

S.áureode uma lesão infectada deve ser cultivada em um meio sólido e, em seguida, preparada uma suspensão apropriada a partir de algumas colônias cultivadas. A suspensão com bactérias é esfregada em umÁgar Mueller-Hinton(imagem 3), (15). Discos impregnados com vários antibióticos são colocados em ágar e incubados por 24 horas a 35°C. As zonas de inibição do crescimento bacteriano, medidas em torno dos discos, devem ser comparadas com as do Documento M100 (M2) do National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Os resultados obtidos podem então ser relatados como resistentes, intermediários ou suscetíveis.

Figura 3. S.áureoteste de sensibilidade a antibióticos. Áreas de crescimento bacteriano inibido são observadas ao redor dos discos de antibióticos. (fonte: phil.cdc.gov)

Formulário de relatório microbiológico para S. aureus

Abaixo estão três exemplos de Relatório de Microbiologia, preenchidos pelo microbiologista após testes laboratoriais e enviados de volta ao médico do paciente.

a) Relatório de drenagem de um carbúnculo cutâneo infectado por S. aureus:

Fonte (localização anatômica):Drenagem do abscesso cervicalColoração de Gram:Muitos cocos gram-positivos. Crescimento intenso. Muitos leucócitos (a presença de glóbulos brancos indica inflamação).Organismo: Estafilococosáureo Suscetibilidade aos antibióticos:

*MIC(Concentração Inibitória Mínima) = a concentração mais baixa de agente antimicrobiano que inibe o crescimento do micróbio. A CIM é determinada pela adição de quantidades crescentes de antibiótico (método de titulação) à amostra médica.**SENS= sensibilidade; S = sensível, R = resistente.*** As bactérias na amostra acima eram suscetíveis à oxacilina, então esta é SA suscetível à meticilina (SA “normal”). Para determinar a resistência à meticilina, a oxacilina é usada em vez da meticilina, porque a meticilina não está mais disponível comercialmente nos Estados Unidos e porque a oxacilina mantém sua atividade durante o armazenamento melhor do que a meticilina(16).

b) Relatório de sangue infectado por MRSA:

Fonte: sangueColoração de Gram: Muitos leucócitos. Poucos cocos gram-positivos. Crescimento leve.Organismo:Estafilococosáureo Suscetibilidade aos antibióticos:

* Alta dose de oxacilina foi necessária para inibir bactérias, por isso é considerado um estafilococo resistente à meticilina – MRSA. 

c) Relato de swab nasal COLONIZADO por S. aureus:

Fonte: Mucosa nasalColoração de Gram: Cocos Gram positivos.Crescimento leve. Sem leucócitos* Organismo:Estafilococosáureo Suscetibilidade aos antibióticos:

• O que é Staphylococcus aureus?
• O que é Staphylococcus epidermidis?
• Tipos de superbactérias MRSA
• Microrganismos – Tipos, Imagens

1. Coloração de Gram (dcccd.edu)
2. Especialista em laboratório de microbiologia  (prep4usmle.com, membro ‘bactitech’)
3. S. aureus nem sempre é amarelo (microbiology.mtsinai.on.ca)
4. Tempo de crescimento da cultura Staph  (cinetwork.com)
5. Teste estapiloslide  (bd.com)
6. Fatores de virulência de estafilococos, toxinas superantígenas (utmb.edu)
7. Cepas não hemolíticas de S. aureus  (cdc.gov)
8. PCR (bionewsonline.com)
9. Teste rápido simultâneo SA/MRSA  (rapidmicrobiology.com)
10. Taqman, kits para detecção de S. aureus em alimentos (foodhaccp.com)
11. Diagnóstico de mastite bovina  (fass.org)
12. Detecção de S. aureus na água (hpa-standardmethods.org.uk)
13. Ágar Mueller-Hinton  (bd.com)
14. Por que a oxacilina é usada em vez da meticilina para detectar MRSA?  (cdc.gov)